Завдання лабораторної служби при наданні екстреної допомоги пацієнтам з інфекцією COVID-19.
- Діагностичне завдання – виявити збудника і верифікувати діагноз.
- Протиепідемічне завдання – швидко виявити пацієнтів небезпечних для оточуючих.
- Прогностичне завдання - за допомогою лабораторних тестів допомогти лікарю-клініцисту виділити групу пацієнтів з потенційно несприятливим прогнозом.
- Моніторинг перебігу захворювання та оцінка ефективності терапії.
Классифікация COVID-19 тестів.
Прямі тести виявлення вірусу SARS-CoV-2 (діагностичні тести):
- Тести, спрямовані на виявлення РНК вірусу.
- Тести, спрямовані на виявлення Антигену вірусу.
Непрямі тести, спрямовані на виявлення специфічної відповіді (антитіл) організму на вірус SARS-CoV-2:
- Тести, засновані на зв'язуванні специфічних антитіл до SARS-CoV-2 з очищеним білком вірусу в реагенте. Факт зв'язування виявляється різними методами (візуально, фотометрія, флуоресценція, хемілюмінісценції).
- Тести, що оцінюють здатність антитіл в сироватці (плазмі) пацієнта нейтралізувати цитотоксичний ефект вірусу in vitro.
Діагностична завдання - виявити збудника і верифікувати діагноз.
Рання діагностика інфікованих (виявлення вірусу в біологічному матеріалі):
- виявлення генетичного матеріалу SARS-CoV-2 (ПЛР-аналіз);
- виявлення антигену вірусу SARS-CoV-2 (методи иммунохімічного аналізу).
Пізня діагностика інфікування, а також оцінка противірусного імунітету:
- виявлення специфічних антитіл класу IgM і IgG в крові пацієнта.
Протиепідемічне завдання - швидко виявити небезпечних для оточуючих пацієнтів.
Середньостатистична інфікована людина починає виділяти в навколишнє середовище велику кількість вірусу приблизно на 3-й день після зараження [N Engl J Med 382;12 March 19, 2020].
Симптоми, якщо вони з'являться, виявляються приблизно на 5-й день зараження. До 8-го дня, незалежно від того, чи з'явилися симптоми чи ні, вірусне навантаження і ступінь контагіозності пацієнта неухильно знижуються [JAMA. 2020;323(15):1488–1494].
Загальний висновок: існує приблизно 5-денне вікно максимальної заразності, що тягнеться від 3-го до 8-го дня після інфікування [Nat Med 26, 672–675 (2020)].
Тести, засновані на виявленні РНК SARS-CoV-2: діагностична задача.
Завдяки високій специфічності і чутливості є основним тестом діагностики інфекції COVID-19, але ...
- тривалий час від моменту збору матеріалу до моменту видачі результату інфекції;
- трудомісткість ПЛР тестування і суворі вимоги до місця виконання, кваліфікації персоналу та необхідність дорогого устаткування;
- висока ймовірність помилки на кожному з етапів проведення аналізу;
- висока вартість якісного ПЛР тестування.
обмежують ефективність ПЛР-методів.
Зв'язок результату тесту для виявлення РНК SARS-CoV-2 і контагіозності пацієнта.
- Тільки третина зразків з позитивними результатами ПЛР викликало зараження клітинної культури.
- Ступінь інфекційності зразка (здатність заражати вірусом SARS-CoV-2 клітинну культуру) висока при рівні порогового числа циклів Ct<24 циклів.
- Контагіозность пацієнтів з вірусним навантаженням Ct>24 - низька.
- Імовірність виділення культури вірусу з зразка з Ct> 24 падає на 32% зі збільшенням Ct на кожну одиницю.
Bullard J, et al. Predicting infectious SARS-CoV-2 from diagnostic samples. Clin Infect Dis. 2020;ciaa 638
Заражений ≠ Заразний
Поряд з високою чутливістю ПЛР до SARS CoV 2 метод володіє відносно низькою специфічністю до контагіозної стадії захворювання - не всі, у кого виявляється вірус SARS-CoV-2 в дихальних шляхах методом ПЛР, виділяють вірус в достатній кількості, щоб становити небезпеку для інших.
Тести для виявлення антигену SARS-CoV-2.
- У зразку мазка з носоглотки, носа, глотки або слини іммунохімічесткі методом детектируются антиген вірусу SARS-CoV-2.
- В даний час для клінічного застосування валідні тільки тести для виявлення нуклеокапсідного антигену.
- Час отримання результату 15-30 хвилин.
- Тести можуть бути без належного обладнання або вимагати POCT-аналізатори для зчитування результату (метод імунофлуоресценції).
Повний текст у версії для скачування.