Современные подходы к организации безотлагательного анализа в рамках оказания помощи пациентам с инфекцией COVID-19

Задачи лабораторной службы при оказании экстренной помощи пациентам с инфекцией COVID-19.

  1. Диагностическая задача – обнаружить возбудителя и верифицировать диагноз.
  2. Противоэпидемическая задача – быстро выявить пациентов опасных для окружающих.
  3. Прогностическая задача – при помощи лабораторных тестов помочь врачу клиницисту выделить группу пациентов потенциально неблагоприятным прогнозом. 
  4. Мониторинг течения заболевания и оценка эффективности терапии.

Классификация COVID-19 тестов.

Прямые тесты обнаружения вируса SARS-CoV-2  (диагностические тесты):

  • Тесты, направленные на обнаружение РНК вируса.
  • Тесты, направленные на обнаружение Антигена вируса.

Непрямые тесты, направленные на обнаружение специфического ответа (антитела) организма на вирус SARS-CoV-2:

  • Тесты, основанные на связывании специфических антител к SARS-CoV-2 с очищенным белком вируса в реагенте. Факт связывания обнаруживается различными методами (визуально, фотометрия, флуоресценция, хемилюминисценция).
  • Тесты определения вирус-нейтрализирующих антител, оценивающие способность антител в сыворотке (плазме) пациента нейтрализовать цитотоксический эффект вируса in vitro.

Диагностическая задача – обнаружить возбудителя и верифицировать диагноз.

Ранняя диагностика инфицированных (обнаружение вируса в биологическом материале):

  • обнаружение генетического материала SARS-CoV-2 (ПЦР-анализ)
  • обнаружение антигена вируса SARS-CoV-2 (методы иммунохимического анализа)

Поздняя диагностика инфицирования, а также оценка противовирусного иммунитета:

  • обнаружение специфических антител класса IgM и IgG в крови пациента.

Противоэпидемическая задача – быстро выявить пациентов опасных для окружающих.

Среднестатистический инфицированный человек начинает выделять в окружающую среду большие количества вируса примерно на 3-й день после заражения [N Engl J Med 382;12 March 19, 2020]. 


Симптомы, если они появятся, обнаруживаются примерно на 5-й день заражения. К 8-му дню, независимо от того, появились ли симптомы или нет, вирусная нагрузка и степень контагиозности пациента неуклонно снижаются [JAMA. 2020;323(15):1488–1494]. 


Общий вывод: существует примерно 5-дневное окно максимальной заразностью, простирающееся от 3-го до 8-го дня после инфицирования [Nat Med 26, 672–675 (2020)]. 

Тесты, основанные на обнаружении РНК  SARS-CoV-2: диагностическая задача.

Благодаря высокой специфичности и чувствительности являются основным тестом диагностики инфекции COVID-19, но... 

  • длительное время от момента сбора материала до момента выдачи результата инфекции
  • трудоемкость ПЦР тестирования и строгие требования к месту выполнения, квалификации персонала и необходимость дорогостоящего оборудования
  • высокая вероятность ошибки на каждом из этапов проведения анализа
  • высокая стоимость качественного ПЦР тестирования

ограничивают эффективность ПЦР-методов.

Связь результата теста для обнаружения РНК SARS-CoV-2 и контагиозности пациента.

  • Только треть образцов с положительными результатами ПЦР вызвало заражение клеточной культуры.
  • Степень инфекционности образца (способность заражать вирусом SARS-CoV-2 клеточную культуру) высока при уровне порогового числа циклов (Ct ) < 24 циклов. 
  • Контагиозность пациентов с вирусной нагрузкой  Ct> 24 – низкая. 
  • Вероятность выделения культуры вируса из образца с Ct> 24 падает на 32% с увеличением Ct на каждую единицу.
    Bullard J, et al. Predicting infectious SARS-CoV-2 from diagnostic samples. Clin Infect Dis. 2020;ciaa 638
     

Зараженный ≠ Заразный 


Наряду с высокой чувствительностью ПЦР к SARS CoV 2 метод обладает относительно низкой специфичностью к контагиозной стадии заболевания - не все, у кого обнаруживается вирус SARS-CoV-2 в дыхательных путях методом ПЦР, выделяют вирус в достаточном количестве, чтобы представлять опасность для других. 
 

Тесты для обнаружения антигена SARS-CoV-2.

  • В образце мазка из носоглотки, носа, глотки или слюны иммунохимичестки методом детектируются антиген вируса SARS-CoV-2.
  • В настоящее время для клинического применения валидированы только тесты для обнаружения нуклеокапсидного антигена.
  • Время получения результата 15-30 минут.
  • Тесты могут быть бесприборные или требовать POCT-анализаторы для считывания результата (метод иммунофлуоресценции).

Полный текст в версии для скачивания.